1847年，身為奧地利維也納總醫院第一產科病區助教的伊格納茨·菲利普·塞麥爾維斯，偶然發現了感染是由致病菌造成的。1861年，法國微生物學家路易斯·巴斯德用鵝頸瓶證實了空氣中有細菌的存在。這兩項研究結果說明空氣中存在著危險的病菌。

1897年，德國微生物學家凱爾·弗路格和他的學生為了驗證呼吸道飛沫的危害性，進行了一次細菌臨床實驗。他們先后在距離培養皿60厘米、2米和6米的位置高聲說話、咳嗽和打噴嚏，結果顯示培養皿中均有細菌生長。

隨著對細菌的研究不斷深入，科學家對病菌防護的要求也相應提高。十九世紀末，德國病理學專家萊德奇發現空氣傳播的細菌也能造成傷口感染，于是他開始建議醫護人員使用紗布罩具以防止細菌感染。

萊德奇發明的口罩只用了單層紗布，而且紗布緊緊包裹口鼻，不僅呼吸不暢，而且體感不適。1897年，德國醫生米庫利奇的學生胡伯納等人意識到當時口罩的使用性欠佳，著手實施改進，他們把兩層紗布剪成長方形，在紗布之間放置鐵絲支架，然后在支架兩側縫制兩根帶子，將帶子固定在使用者的后腦勺上。在支架的幫助下，口罩由平面變成了立體，不但解決了呼吸不暢的問題，而且方便可靠。

對口罩的改進并未就此止步。1899年，法國醫生保羅·伯蒂發現只有不少于六層紗布的口罩，才能有效預防口腔飛沫的傳播。他將這種口罩縫在衣領上，使用時把口罩翻上來用手按著即可。這么做顯然極不方便，他在六層口罩的上緣縫上兩根帶子，用以系結，下緣兩根帶子固定在衣領上?？谡值慕Y構又進化了一步。